(编辑：jimmy 日期: 2024/11/2 浏览：2)
荧光定量PCR技术中，有一个很重要的概念 —— Ct值。C代表Cycle，t代表threshold，Ct值的含义是：每个反应管内的荧光信号到达设定的域值时所经历的循环数。
一般都是相对量，则用delta delta CT方法来计算。举例如下：对照组基因A的CT值为20， 内参：比如βactin)CT值15。实验组基因A CT值18，内参CT值14。
如果是realtime做表达量，用excel的制图，将每个个体的Ct值平均数做出柱状图就可以了。如你还做了标曲，就用制图中的散点图看R2值。其实这些功能做定量PCR的时候电脑程序应该会自动分析才对，具体情况具体分析。
实时荧光定量PCR 是将标记有荧光素的Taqman探针与模板DNA混合后，完成高温变性，低温复性，适温延伸的热循环，并遵守聚合酶链反应规律，与模板DNA互补配对的Taqman探针被切断，荧光素游离于反应体系中，在特定光激发下发出荧光，随着循环次数的增加，被扩增的目的基因片段呈指数规律增长，通过实时检测与之对应的随扩增而变化荧光信号强度，求得Ct值，同时利用数个已知模板浓度的标准品作对照，即可得出待测标本目的基因的拷贝数。
PCR实验室污染原因有四个方面：
(一) 标本间交叉污染：标本污染主要有收集标本的容器被污染，或标本放置时，由于密封不严溢于容器外，或容器外粘有标本而造成相互间交叉污染
(二) PCR试剂的污染：主要是由于在PCR试剂配制过程中，由于加样枪、容器、双蒸水及其它溶液被PCR核酸模板污染。
(三) PCR扩增产物污染：因为PCR产物拷贝量大(一般为1013拷贝/ml)，远远高于PCR检测数个拷贝的极限，所以极微量的PCR产物污染，就可造成假阳就可形成假阳性。
还有一种可能造成PCR产物污染的形式是气溶胶污染；
(四) 实验室中克隆质粒的污染：
防止污染解决办法：
(一) 划分操作区：目前，普通PCR尚不能做到单人单管，实现完全闭管操作，但无论是否能够达到单人单管，均要求实验操作在三个不同的区域内进行，PCR的前处理和后处理要在不同的隔离区内进行：
1. 试剂准备区。
2．标本制备区。
3. PCR扩增区及分析区。
(二) 分装试剂：PCR扩增所需要的试剂均应在生物安全柜、装有紫外灯的超净工作台或负压工作台配制和分装。所有的加样器和吸头需固定放于其中，不能用来吸取扩增后的DNA和其他来源的DNA：
(三) 实验操作注意事项
尽管扩增序列的残留污染大部分是假阳性反应的原因，样品间的交叉污染也是原因之一。因此，不仅要在进行扩增反应是谨慎认真，在样品的收集、抽提和扩增的所有环节都应该注意：
1. 戴一次性手套，若不小心溅上反应液，立即更换手套；
2. 使用一次性吸头，严禁与PCR产物分析室的吸头混用，吸头不要长时间暴露于空气中，避免气溶胶的污染；
3. 避免反应液飞溅，打开反应管时为避免此种情况，开盖前稍离心收集液体于管底。若不小心溅到手套或桌面上，应立刻更换手套并用稀酸擦拭桌面；
4. 操作多份样品时，制备反应混合液，先将dNTP、缓冲液、引物和酶混合好，然后分装，这样即可以减少操作，避免污染，又可以增加反应的精确度；
5. 最后加入反应模板，加入后盖紧反应管；
6. 操作时设立阴阳性对照和空白对照，即可验证PCR反应的可靠性，又可以协助判断扩增系统的可信性；
7. 尽可能用可替换或可高压处理的加样器。
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原因:科学研究中对研究对象有影响、作用或处理意义的条件有一个或多个,但只探究其中某个对实验对象有影响或作用。通过设置对照实验,既可排除无关因素(无关变量)对自变量的干扰,又可增加实验结果结论的可信和说服力。
2.阴性对照是肯定不会出现预期结果的组。做到“度肯定”需要精密的实验设计、高度可靠的预实验以及实验者的操作。
3.阳性对照是为了说明新疗法的有效性。与阴性对照相比,阳性对照是与要进行的实验。
1、如何看荧光定量PCR的结果
按公式计算：对照组-Ct ＝对照组（Ct 目的基因－Ct 内参基因）－对照组（Ct 目的基因－Ct 内参基因）
2、荧光定量PCR的结果（CT值）怎么分析
目的基因荧光达到阈值时的循环数～Ct值越低代表起始模板数量越大～
3、miRNA荧光定量PCR结果怎么看
荧光定量我用罗氏的反应速度算是相当快的,在样本处理（提出核酸）后,放在荧光定量PCR仪器上一般需要30分钟~1小时左右.但是如果你的样本比如支原体的含量非常高,可能在没有运行结束已经可以看出结果了,但是如果说5分钟就出结果了,确实太快了点.如果是realtime做表达量，用excel的制图，将每个个体的Ct值平均数做出柱状图就可以了。如果你还做了标曲的话，就用制图中的散点图看R2值。 其实这些功能做定量PCR的时候电脑程序应该会自动分析才对。 具体情况具体分析。
4、如何分析荧光定量pcr实验结果？
如果是realtime做表达量，用excel的制图，将每个个体的Ct值平均数做出柱状图就可以了。如果你还做了标曲的话，就用制图中的散点图看R2值。
其实这些功能做定量PCR的时候电脑程序应该会自动分析才对。
具体情况具体分析。
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5、乙肝dna荧光定量PCR结果怎么看病毒数量
8.66表示lg（病毒数）=8.66、即病毒数=10^8.66=457088189.6拷贝
参考范围是0-3即0-1000拷贝
检测结果已超出参考范围，表明乙肝病毒呈阳性
6、荧光定量pcr扩增结果怎么表示
实时荧光定量PCR( realtime fluorescence quantitative PCR，RTFQ PCR) 是1996 年由美国Applied Biosystems 公司推出的一种新定量试验技术，它是通过荧光染料或荧光标记的特异性的探针，对PCR产物进行标记跟踪，实时在线监控反应过程，结合相应的软件可以对产物进行分析，计算待测样品模板的初始浓度。
检测指标是：各样品的目的基因和管家基因分别进行Realtime PCR反应。PCR产物与 DNA Ladder在2%琼脂糖凝胶电泳，GoldView染色，检测PCR产物是否为单一特异性扩增条带。
原理：
PCR扩增时在加入一对引物的同时加入一个特异性的荧光探针，该探针为一寡核苷酸，两端分别标记一个报告荧光基团和一个淬灭荧光基团。探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；刚开始时, 探针结合在DNA任意一条单链上;PCR扩增时，Taq酶的5’端－3’端外切酶活性将探针酶切降解，使报告荧光基团和淬灭荧光基团分离，从而荧光监测系统可接收到荧光信号，即每扩增一条DNA链，就有一个荧光分子形成，实现了荧光信号的累积与PCR产物形成完全同步。
7、实时荧光定量PCR与普通PCR的区别是什么？结果有何异同？能说明的问题是什么？
二者结果相同。都能说明生物体外的特殊DNA复制的整个过程的扩增效率和溶解温度情况。
PCR是生命科学研究，特别是分子生物学领域的一个重要基础技术，基因测序则是一个集合了微流控、光学、PCR等多种基础技术形成的一个应用技术。
先回答题主的几个问题：
1.PCR扩增需要特定的起点和终点，对应的就是上下游引物之间的目的扩增片段；
基因测序打断后还要进行接头连接，就是给所有打断的DNA片段加上统一的头和尾；
所以所有的PCR不是对应某个特定的基因位点，而是全部对应加上的通用接头（adapters），所以保证了所有的片段都可以被扩增到。
2.PCR跟基因测序的概念在实际对用户宣传中，都会扩大了基因测序的概念，PCR只能进行基因检测，即检测特定片段是否存在，从而推断基因是否发生突变，举个例子，假设某个基因的第200个碱基存在突变A－G两种可能，我们可以设计特定的引物，让有A突变的基因可以扩增出来，G突变的基因无法被扩增，这样我们就可以通过对PCR产物的分析来确定该基因是A型还是G型，这是基因检测行为。而基因测序行为则是直接把该位点的碱基检测出来，从而来确定该位点是A－T－C－G的某一种。
总的来说，PCR的基因检测只能对已知的突变进行检测，而基因测序可以直接测定该位置的基因序列，即还可以发现未知的突变。
pcr条带位置不对，说明pcr产物大小与预期不一致，要么变大了，要么变小了。其本质原因只有一个，pcr扩增是非特异性的扩增。
pcr非特异性扩增的原因有几个方面:
1.模板DNA或rna不对，包括模板污染，目标基因突变（部分缺失或有插入突变）；2.引物特异性不强或引物设计错误；3.pcr反应体系退火温度偏低，导致非特异性扩增。
肠道菌群的检测可通过粪便培养进行。通常情况下，人体新排出的粪便被放入一种特殊的细菌培养基中进行细菌培养。通过对细菌的培养可以知道细菌的种类和每种细菌的具体数量。正常情况下，人体肠道中的细菌种类相对固定，细菌在各种细菌中所占的比例相对固定。各比例的细菌相互作用，维持正常肠道菌群环境，保证肠道正常功能。如果发现细菌种类比例或数量失衡，一些病原菌的过度生长会影响肠道的正常功能，并出现腹泻等症状